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抗體儲(chǔ)存秘籍,一般人我不告訴!

日期:2016-10-14 09:17:14

抗體由于性質(zhì)和所使用的儲(chǔ)存條件不同,其存儲(chǔ)的“保質(zhì)期”可能從幾周到幾年不等。盡管每個(gè)抗體存儲(chǔ)的最佳條件是獨(dú)特的,但還是能夠總結(jié)出一些關(guān)于抗體存儲(chǔ)建議和一般準(zhǔn)則。

一:低溫對(duì)抗體的保存至關(guān)重要

 

一般來(lái)說(shuō),抗體最好存放在≤4℃的清潔,滅菌的玻璃或塑料管。貯存在室溫下通常會(huì)由于微生物的生長(zhǎng)導(dǎo)致抗體退化和/或失活。抗體儲(chǔ)存液放在4℃環(huán)境中1天或者幾周內(nèi)其活性不會(huì)受到明顯影響。另外,抗體中可以加入終濃度為50%的甘油或乙二醇儲(chǔ)存于-20℃。通常我們?yōu)榱吮苊夥磸?fù)凍融,可以分裝抗體。還可以加入抗微生物藥物(如疊氮化鈉或硫柳汞)以避免微生物的生長(zhǎng)。帶有標(biāo)記的抗體通??梢栽诟视突蛞叶贾杏?20℃保存1-2年。但是,在冷凍保護(hù)劑的污染物可能會(huì)影響酶的活性。

 

一些研究人員發(fā)現(xiàn)多克隆抗體在血清中于-20℃保存十年其活性損失不大。然而,一旦抗體被純化后,儲(chǔ)存在50%的甘油中于-20℃保存,即使沒(méi)有凍融,其活性的損失也可以觀察到,盡管其進(jìn)程仍然非常緩慢。單克隆抗體可以用兩種方式保存:第一,保存在50%的甘油存放于-20℃;第二,也是比較好的方式,將其保存在飽和硫酸銨于4℃或-20℃(4℃更好)保存。在大多數(shù)情況下,凍干的抗體最好是存放在-20℃。

 

二:向抗體儲(chǔ)存液中加入抗氧化劑是防止抗體因氧化失效的關(guān)鍵步驟

 

氧化反應(yīng)是某些酶,尤其是巰基酶的共同問(wèn)題。為了防止氧化反應(yīng)對(duì)抗體的破壞,我們可以向抗體中加入一些還原劑(如二硫蘇糖醇(DTT)或2 - 巰基乙醇(2-ME))。實(shí)驗(yàn)證明:越高的pH環(huán)境和溫度,有酶活性的抗體的保存時(shí)間越短。此外,加入0.1mM的銅離子,其氧化率增加;而加入金屬螯合劑EDTA可增加有效期。

 

三:蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑和抗生素對(duì)抗體的穩(wěn)定儲(chǔ)存發(fā)揮著重要作用

 

蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑可以延長(zhǎng)大多數(shù)蛋白質(zhì)在4℃或-20℃的保質(zhì)期。而25-50%的甘油或乙二醇等防凍劑有助于穩(wěn)定抗體,防止在-20℃環(huán)境中形成冰晶,避免其破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。蛋白酶抑制劑的加入可以防止抗體發(fā)生水解反應(yīng)導(dǎo)致其失活。而抗微生物藥物,如最終濃度在0.02-0.05%(W / V)的疊氮化鈉(NaN3的)或終濃度為0.01%(W / V)的硫柳汞可以抑制微生物的生長(zhǎng)。


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