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脫水

日期:2016-10-24 11:19:24

所謂脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來,以利于有機(jī)溶劑的滲入。在脫水前,固定后的組織應(yīng)該水洗(10~20分鐘),否則易造成脫片和染色不鮮艷,也不利于蠟塊內(nèi)抗原的長期保存。脫水是否徹底,直接關(guān)系到組織是否能充分透明。過去習(xí)慣認(rèn)為脫水主要跟高濃度乙醇有關(guān),而忽視了與低濃度乙醇的關(guān)系,其實75-80%濃度的乙醇具有極強(qiáng)穿透力,在短時間內(nèi)可以置換出大量的水份,而高濃度乙醇容易使蛋白質(zhì)凝固,在組織表面形成一層硬殼,乙醇難以滲透到組織塊中間去,導(dǎo)致組織脫水不佳;高濃度乙醇的作用是脫去從低濃度到高濃度之間的水份。如果脫水時加溫過高(36-50℃)、使用丙酮等,都易導(dǎo)致組織收縮過度、發(fā)硬和發(fā)脆。

組織脫水引起的組織發(fā)脆有三種原因:一是初始脫水液濃度過高引起組織質(zhì)地發(fā)生改變、硬化;二是組織質(zhì)地過于細(xì)膩,如小動物肝臟;第三種是假脆(也是組織發(fā)脆的最主要原因),由于脫水不足,組織在浸蠟時蠟無法滲透到組織中去,在高溫下“干烤”導(dǎo)致發(fā)硬、發(fā)脆,切片會出現(xiàn)粉粉的或一絲絲的現(xiàn)象,子宮肌瘤等較硬的組織還會出現(xiàn)一棱棱的現(xiàn)象,甚至?xí)麎K整塊往外崩;嚴(yán)重脫水不足的組織中間發(fā)軟、凹陷,甚至還會有水。

脫水的關(guān)鍵是調(diào)整低濃度和高濃度乙醇脫水時間的正確搭配,低濃度乙醇可以使組織收縮減少,利于切片,高濃度乙醇使組織脫水更徹底。一般情況下,標(biāo)本脫水時間(35℃)為75%乙醇1.5h、85%乙醇2h、95%乙醇(2道大)各1.5h至2h、無水乙醇(2道)各1.5h至2h。小標(biāo)本脫水時間與大標(biāo)本差異不大,一般沒必要分開,小標(biāo)本發(fā)脆,往往是因為紙包太厚或相互粘在一起,導(dǎo)致組織脫水不徹底引起。固定好的淋巴組織,應(yīng)從低濃度乙醇開始脫水,在95%乙醇中的時間延長至4h左右,以便徹底脫水。

脫水時間長短,與室溫密切相關(guān),同時也與組織的厚薄、組織類型、組織固定程度等條件相關(guān)。一般而言,12~15℃的室溫,可作為一個臨界溫度值。當(dāng)室溫高于此溫度時,組織容易脫水,可適當(dāng)縮短脫水時間;室溫低于該溫度時,應(yīng)適當(dāng)延長脫水時間。從規(guī)范化角度出發(fā),應(yīng)該盡可能地保持溫度、濃度和作用時間的恒定。使用全封閉自動脫水機(jī)更易標(biāo)準(zhǔn)化。更換脫水液,應(yīng)以量為基礎(chǔ),定量更換。根據(jù)我科經(jīng)驗,如試劑用量為500ml,每500個蠟塊更換一次為宜。在更換脫水液時,為保證準(zhǔn)確的低濃度乙醇的濃度,不提倡全部試劑向前退的方法。85%乙醇退到75%乙醇,95%乙醇退到85%乙醇,無水乙醇退到95%乙醇,是不正確的。第二道的95%乙醇可以退到第一道95%乙醇,第二道無水乙醇也可以退到第一道無水乙醇。由于脫過水的乙醇含有大量的脂肪和蛋白質(zhì),因此,最好全部更換,保證各梯度乙醇的真正濃度。

常規(guī)切片脫水的原則是在最短的時間內(nèi),使組織脫水徹底,收縮度、硬度適中,切片舒展、保證質(zhì)量。在固定充分的情況下,組織在乙醇甚至無水乙醇內(nèi)長時間乃至幾天停留,均不會導(dǎo)致組織發(fā)脆。

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